Q：培養(yǎng)基 pH 值異常
A：
? 二氧化碳分壓設置錯誤：根據培養(yǎng)基中碳酸氫鈉的濃度而增加或降低培養(yǎng)箱中二氧化碳分壓。
? 培養(yǎng)箱無二氧化碳：定期觀察二氧化碳壓力表，及時更換二氧化碳鋼瓶。
? 細胞培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊：將蓋子旋松 1/4 圈，或換成透氣蓋培養(yǎng)瓶。
? 細菌、真菌污染 丟棄細胞和培養(yǎng)基。
? 培養(yǎng)基中的平衡鹽不匹配：二氧化碳平衡環(huán)境中使用以 Earle's 平衡鹽為基礎的培養(yǎng)基，大氣條件下使用以Hank's 平衡鹽為基礎的培養(yǎng)基。
? 碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)緩沖能力不足：加入 HEPES 緩沖液，使其終濃度為 10-25 mM。
Q：細胞生長緩慢
A：
? 培養(yǎng)基或血清改變：比較不同培養(yǎng)基中葡萄糖、氨基酸等成分有無差異；增加細胞接種密度；更換新鮮培養(yǎng)基。
? 必需生長促進成分 ( 如 L- 谷氨酰胺或生長因子 ) 缺乏、耗盡或降解使用新鮮培養(yǎng)基或向現(xiàn)有培養(yǎng)基中添加必需成分。
? 細胞初始接種密度過低：增大細胞接種密度。
? 支原體污染：檢測培養(yǎng)物有無支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進行清除。
? 細胞代次過高：取用新的細胞。
? 輕度細菌或真菌污染：在添加抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，如果培養(yǎng)物被污染，則棄之。
試劑儲存不當血清應置于-5℃至 -20℃下儲存 ；培養(yǎng)基應置于 2-8℃下避光儲存；完全培養(yǎng)基應置于2-8℃下避光儲存，并限在2周內使用。
Q：細胞死亡
A：
? 胰酶消化過度：縮短胰酶消化時間或降低消化用胰酶的工作濃度。
? 細胞狀態(tài)差：取用新的細胞。
? 支原體污染：檢測培養(yǎng)物有無支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進行清除。
? 培養(yǎng)基中無附著因子：如采用無血清培養(yǎng)方法，應確保其含有附著因子，或使用包被過的培養(yǎng)器皿。
? 培養(yǎng)箱中無二氧化碳：定期觀察二氧化碳壓力表，及時更換二氧化碳鋼瓶。
? 培養(yǎng)箱溫度有波動：監(jiān)測培養(yǎng)箱內溫度。
? 轉染試劑毒性過強，細胞代次過高，質粒純度差使用低毒性的轉染試劑或在轉染后及時換液；使用低代次細胞轉染 ；使用高品質的質粒轉染。
? 細胞解凍或凍存過程中損傷大：取用新的細胞。
? 培養(yǎng)基的滲透壓不正確：檢查完全培養(yǎng)基的滲透壓。大多數哺乳動物細胞可耐受的滲透壓為 260-350 mOsmol/kg，昆蟲細胞可耐受的滲透壓為 340-380 mOsmol/kg。
? 培養(yǎng)基中有毒代謝產物蓄積過多：更換新鮮培養(yǎng)基。
